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标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻二---氢钾约0.16g，精密称定，加无水冰---20ml使溶解，长春柠檬酸，加结晶紫指示液1滴，用本液缓缓滴定至蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml滴定液（0.1mol/l）相当于20.42mg的邻二---氢钾。根据本液的消耗量与邻二---氢钾的取用量，算出本液的浓度，即可。

柠檬酸的发酵因、工艺、原料而异，但在发酵过程中还需要掌握一定的温度、通风量及ph值等条件。一般认为，黑曲霉适合在28～30℃时产酸。温度过高会导致菌体大量繁殖，柠檬酸批发，糖被大量消耗以致产酸降低，同时还生成较多的草酸和---酸；温度过低则发酵时间延长。微生物生成柠檬酸要求低ph，适ph为2～4，这不仅有利于生成柠檬酸，减少草酸等杂酸的形成，同时可避免杂菌的污染。